產品簡介   

PNGase F (N-糖苷酶 F)是一種酰胺水解酶，經過和平空間站伊麗莎菌克隆，主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。翌圣PNGase F（Glycerol-free）, N-糖苷酶 F (無甘油，100000 U/mL)在酵母中重組表達（儲存緩沖液中無甘油，比活性：100000 U/mL），可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復雜的寡糖糖蛋白，儲存緩沖液中無甘油有助于在HPLC 和質譜分析中獲得最佳結果。PNGase F的切割位點為糖蛋白內側N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵，同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉化為天冬氨酸。本產品帶His標簽，常應用于抗體及其相關蛋白完全去糖基化。

   另外，我司還提供Fast PNGase F, N-糖苷酶 F（快速版）（Cat#20406ES, 可以在數分鐘內對抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進行徹底和快速的去糖基化），儲存緩沖液中含甘油的PNGase F, N-糖苷酶 F (100000 U/mL)（Cat#20407ES，比活性：100000 U/mL）、PNGase F, N-糖苷酶 F (750000 U/mL)（Cat#20415ES，比活性：750000 U/mL），以及其他類型的糖苷酶，如Endo H糖苷內切酶H（Cat#20414ES），Endo S糖苷內切酶S（Cat#20413ES）。

產品信息

產品性質

儲存條件

2~8℃保存，有效期1年。嚴禁凍存，避免反復凍融。

使用方法

1、變性條件下蛋白質去糖基化：

1）在水中加入1 μL Buffer 1和目標糖蛋白（1-20 μg），至終體積10 μL；

2）100℃溫度下煮沸10 min使其變性，冰上冷卻，離心10秒；

3. 加入2 μL的Buffer 2、2 μL的10％NP-40、6 μL去離子水，總反應體積20 μL；
4. 加入1-2 μL的PNGase F（Glycerol-free），輕輕混勻。在37℃孵育1-3 h。

2、非變性條件下蛋白質去糖基化：

1）在水中加入2 μL的Buffer 2和目標糖蛋白（1-20 μg）至最終體積為 20 μL。

2）加入 2~5 μL 的 PNGase F（Glycerol-free）, 輕輕混勻。

3）37°C 孵育 4-24 h。

注意：在變性條件下大多數底物能夠更好的去糖基化，在非變性條件下可能需要增加PNGase F（Glycerol-free）的量和延長孵育時間。

注意事項

1. PNGase F（Glycerol-free）建議搭配我司提供的配套緩沖液使用，按我司說明書建議的操作量配套緩沖液足夠。如您由于使用體系造成配套緩沖液不足，可咨詢當地銷售進行購買（Cat#20407-B, 包含20407-B1（750 μL）、20407-B2（1500 μL）、20407-B3（1500 μL）, PNGase F（Glycerol-free）, N-糖苷酶 F (無甘油，100000 U/mL)（Cat#20405ES）與PNGase F, N-糖苷酶 F (100000 U/mL)(Cat#20407ES）的配套緩沖液相同）

2. 本產品僅作科研用途。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240718