壓力蒸汽滅菌生物指示劑

壓力蒸汽滅菌生物指示劑是由嗜熱指肪桿菌（ATCC 7953）芽孢菌片、恢復培養基和外管組成。菌片含菌量為5.0×～5.0× cfu/片。生物指示劑的抗力符合國際標準和國家標準的規定：既在121℃飽和蒸汽作用下，存活時間≥3.9min，殺滅時間≤19min，D 10值1.3～1.9min。
【適用范圍】
適用于121℃下排氣式壓力蒸汽滅菌器、132℃～134℃預真空或脈動真空壓力蒸汽滅菌器、134℃～136℃臺式或卡式壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的監測和制藥工業、醫院制劑生產等各行業使用的壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的監測。
【使用方法】
1使用時，將生物指示劑放入標準檢測包的中心或待滅菌物品包的中心，置于滅菌器的難消毒的位置按規定的滅菌溫度和時間進行滅菌處理。
2滅菌完畢，即刻將生物指示劑取出，蓋朝上垂直握于手中，用專門工具夾碎管內安瓶，讓培養液流出浸沒菌片，置于56℃恒溫培養箱內或配套的微型培養器內培養24小時觀察初步結果，48小時觀察結果，按規定每月至少用生物指示劑進行一次滅菌效果監測。
【結果判定】
培養后生物指示劑中的溴甲酚紫培養液由紫色澄清液體變為黃色澄清液體即表示有菌生長，判定為滅菌不合格；培養液仍為紫色澄清液體為無菌生長，同時陽性對照管中的嗜熱脂肪桿菌生長正常即培養液由紫色澄清液體變為黃色澄清液體，判定為滅菌合格。
【注意事項】
1將生物指示劑管從滅菌器內取出或從冰箱內取出后，需在室溫下放10min左右，再夾碎安瓿，以免過熱或過冷夾碎外管。
2液體培養基的pH值低于7.0或高于7.5，均可使嗜熱脂肪桿菌不能生長；
3培養溫度須在56℃～65℃之間，否則可導致嗜熱脂肪桿菌生長不良，或不能生長。
4滅菌處理后，生物指示劑中的液體培養基顏色與壓力蒸汽滅菌前比較會變淺，呈顯淺紫色，這種變化屬正常現象。
5用恢復培養液在56℃培養時間過長（72小時以上），陽性對照管中培養液的黃色容易消退，培養液逐漸干燥，應注意每天觀察，隨時記錄培養結果。
6本生物指示劑于4℃條件下保存。
　【包裝規格】20支/盒，10盒/箱。
　【有效期】12個月。

壓力蒸汽滅菌生物指示劑使用中應注意的問題

一、術語解釋

1、載體：實驗微生物的支持物

2、指示菌：可代替相應致病菌抗力水平的非致病菌，通常使用指定的國際標準菌株或國家認定的標準菌株。

3.存活時間（ST）：用于生物指示物抗力鑒定時，指受試的指示物樣本，經殺菌因子作用后全部樣本有菌生長的最長作用時間（min）。

4.殺滅時間（KT）：用于生物指示物抗力鑒定時，指受試的指示物樣本，經殺菌因子作用后全部樣本無菌生長的最短作用時間（min）。

5.Q值：殺滅微生物數量達90%所需的時間（min）。

6.殺滅率：在微生物殺滅實驗中，用百分率表示微生物數量減少的值。

7.菌落形成單位（cfu）：在活菌培養計數時，由單個菌體或聚集成團的多個菌體，在固體培養基上生長繁殖所形成的集落，稱為菌落形成單位，以其表達活菌的數量，一般一個菌落形成單位代表一個菌。

8.活菌計數法：測定每毫升液體中含活菌的數量，是消毒效果檢測試驗中基本的微生物操作技術之一。

二、使用

1.消毒實驗操作必須樹立嚴格的無菌觀念，一是保證人員安全，防止實驗室感染，二是保證實驗質量，防止實驗污染。

2.壓力蒸汽滅菌效果監測方法可分為物理法有留點溫度計測定法、溫度記錄儀、定時計；化學法有指示卡監測法、化學指示菌管、化學指示膠帶：生物法有生物指示劑包括嗜熱脂肪桿菌（Atcc7953）芽孢生物指示劑（又稱自含式生物指示劑）和生物指示劑菌片。

3.按照國家標準和國家標準規定嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片回收菌量為5.0×105cfu/片（ml）～5.0×106cfu/片（ml）,在飽和蒸汽作用下，存活時間（st）≥3.9min,殺滅時間（kt）≤19min,D值1.3min-1.9min.

4.壓力蒸汽滅菌生物指示劑主要用于121℃下排氣式壓力蒸汽滅菌器、132℃～134℃預真空或脈動真空壓力蒸汽滅菌器、134℃～136℃臺式或卡式蒸汽滅菌器滅菌效果監測。

5.壓力蒸汽滅菌用的指示菌為嗜熱脂肪桿菌（Atcc7953）芽孢，干熱與化學消毒劑用指示菌為枯草桿菌黑色變種（Atcc9372）芽孢。

三、常見問題

1.消毒試驗指示菌選擇的條件？

答：（1）指示菌對殺菌因子的抗力應大于或等于所代表的同一類致病菌，易抗力，穩定，易儲存。

（2）對營養條件要求不高，在普通培養基上生長。

（3）在形態上或培養特征上易辨認，易于其他菌區別。

（4）對人與動物基本無致病性。

（5）培養與制備可達標準化。

2.壓力蒸汽滅菌生物指示劑（菌管和菌片）生物指示劑經壓力蒸汽滅菌處理后，置56℃培養為陽性原因何在？

答：可能的原因為：

（1）壓力蒸汽滅菌器性能不合格。如新購的設備性能不穩定，未做B-D試驗即用，舊的設備未定期檢修，指示溫度和壓力與滅菌器內實際溫度和壓力不一致。

（2）壓力蒸汽滅菌工藝不當。如裝置滿載或超過2/3，裝放方式不合理，包裝容器影響蒸汽穿透或冷空氣的排出，冷空氣未排凈等。

（3）生物指示劑的殺菌量超標，指示菌抗力太強。

（4）恢復培養基未按產品使用手冊或消毒技術規范上規定的配方設備，PH值＜7.2或＞7.5。

3.壓力蒸汽滅菌生物指示劑菌管正常培養時對照菌管培養液為什么不變為黃色？

答：可能的影響因素為：

（1）指示菌未能與恢復培養基充分接觸。滅菌處理后，用特殊工具夾碎玻管使恢復培養基與菌片接觸后，應未充分振搖，使菌片上的指示菌能與恢復培養基充分接觸。

（2）滅菌處理時破壞恢復培養基中的葡萄糖，使指示菌在繁殖時不能分解葡萄糖產酸反應恢復培養基只能在115℃飽和蒸汽滅菌30min,若在121℃飽和蒸汽下滅菌30min則易破壞恢復培養基中的葡萄糖。

（3）恢復培養基的PH值＜7.2或＞7.5導致嗜熱脂肪桿菌芽孢不能正常生長繁殖。

4.回收指示菌片的菌量時應注意什么？

答：在回收菌片含菌時，應先將菌片置于回收液中浸泡30min，充分振打，直到濾紙分片后，濾紙上的指示菌完全洗下再進行活菌計數。如把菌片置于回收液試管中即刻振打80次或置滅菌平皿回收液內旋轉200次，不能使濾紙菌片上的細菌芽孢完全洗下，其回收菌量也達不到標準。