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2025-01-21 09:33:29熒光標(biāo)記肽、: 熒光標(biāo)記肽是一種經(jīng)過特殊處理的肽類分子，其中融入了熒光基團(tuán)。這種熒光基團(tuán)能夠在特定波長光的激發(fā)下發(fā)出熒光，從而實(shí)現(xiàn)對肽分子的追蹤和可視化。熒光標(biāo)記肽在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究、藥物研發(fā)及蛋白質(zhì)相互作用等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。它們可以幫助研究人員觀察肽在細(xì)胞內(nèi)的定位、動態(tài)變化及與其他分子的相互作用，是研究生物過程和疾病機(jī)制的重要工具。通過熒光標(biāo)記，可以更加直觀、精確地解析肽的功能和作用機(jī)制。

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熒光標(biāo)記肽、問答

2022-07-22 15:27:25熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，熒光標(biāo)記怎么選？: 熒光定量PCR技術(shù)是將常規(guī)的PCR和熒光檢測技術(shù)相結(jié)合，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，以此實(shí)現(xiàn)對初始模板的定量分析。熒光定量PCR技術(shù)作為當(dāng)今生物學(xué)研究的重要手段之一，在基礎(chǔ)科學(xué)、生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)研究、法醫(yī)學(xué)、診斷學(xué)等多方面具有廣泛的應(yīng)用前景。說到熒光定量PCR技術(shù)，我們經(jīng)常會問類似于“你的實(shí)驗(yàn)是染料法還是探針法”，“你用的探針是什么類型”等之類的問題，這其實(shí)是對熒光標(biāo)記的選擇。根據(jù)熒光標(biāo)記的不同，可以將熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)分為探針法和染料法兩大類。染料法染料法利用能與DNA雙鏈結(jié)合的染料來實(shí)現(xiàn)，如SYBR Green I。該染料在游離狀態(tài)下呈現(xiàn)微弱的熒光，一旦與雙鏈DNA的雙螺旋小溝結(jié)合，其綠色熒光增強(qiáng)約1000倍。因此其總的熒光強(qiáng)度與雙鏈DNA含量成正比，利用這一關(guān)系可以反映生成的PCR產(chǎn)物的量（圖 1）。SYBR Green I的吸收約在497 nm，發(fā)射波長約在520 nm，與FAM熒光分子的光譜性質(zhì)類似，因此在所有的熒光定量PCR設(shè)備中都是通道檢測，即“FAM/SYBR Green I”通道。▲ 圖1 染料法原理圖理論上，所有能與雙鏈DNA結(jié)合的染料都可以用于qPCR檢測，如溴化乙錠EtBr，碘化丙啶PI，吖啶橙、Cy3等。而選擇用于qPCR反應(yīng)的染料通常會從信號強(qiáng)度、生物安全性、檢測簡便性和經(jīng)濟(jì)適用性這幾個因素考慮。例如EtBr可能存在潛在的致癌性。綜合考慮下來，SYBR Green I成了比較理想的選擇。目前，使用Evagreen的實(shí)驗(yàn)者也越來越多，Evagreen作為一種新型的染料，其光譜性質(zhì)與SYBR Green I類似，其優(yōu)勢在于：? 對PCR反應(yīng)的抑制程度小。高濃度SYBR Green I會強(qiáng)烈抑制PCR反應(yīng)，因此要控制其使用濃度，一定程度上降低了DNA檢測的靈敏度。? 與DNA結(jié)合密度高。單位長度的DNA雙鏈上Evagreen的密度更高，為飽和型染料，消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷，提高檢測靈敏度的同時也可用于高分辨率溶解曲線HRM。? 化學(xué)性質(zhì)更穩(wěn)定，適合長期保存。TaqMan 探針TaqMan 探針基本可以滿足60%以上的qPCR實(shí)驗(yàn)，如常規(guī)的基因表達(dá)和拷貝數(shù)變異CNV實(shí)驗(yàn)。TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的5'末端，而淬滅劑則在3'末端（圖2）。PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收; PCR擴(kuò)增時, Tag酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。常用的熒光基團(tuán)是FAM，TET，VIC，HEX。▲ 圖2 Taqman探針MGB探針對于要分辨單堿基差異的SNP實(shí)驗(yàn)，采用對堿基錯配容忍度更低的MGB探針，在淬滅基團(tuán)后加入了DPI3基團(tuán)（圖3），從而提高了與靶標(biāo)結(jié)合的親和力；而且可以對靶點(diǎn)堿基進(jìn)行化學(xué)修飾，如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid。▲ 圖3 MGB探針雙雜交探針Taqman探針對探針的長度有比較嚴(yán)格的要求，雙雜交探針則消除了這一“缺陷”。雙雜交探針是由兩條寡核苷酸單鏈組成，一條的3’端帶有供體熒光分子，另一條的5’端帶有受體熒光分子（圖4）。游離狀態(tài)下熒光供體會發(fā)出熒光，但當(dāng)兩條單鏈都匹配到模板鏈上時，就會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET，受體熒光分子就可以發(fā)出熒光，其熒光強(qiáng)度與生成的產(chǎn)物的量成正比。雙雜交探針的優(yōu)勢有兩點(diǎn)：擺脫了探針長度的限制，較長的探針可以提高與模板匹配的成功率；只有上下游兩條探針都正確匹配后才能檢測到受體熒光分子發(fā)出的熒光，特異性有所提高。▲ 圖4 雙雜交探針分子信標(biāo)探針游離狀態(tài)下，分子信標(biāo)探針是一種莖環(huán)結(jié)構(gòu)，其環(huán)狀部分的15-30個堿基可以與靶標(biāo)區(qū)域相結(jié)合匹配，下端的配對區(qū)域（左右一般各5-6個堿基）則由重復(fù)的GC組成，從而將5’的熒光分子和3’的淬滅基團(tuán)緊緊聚在一起，熒光發(fā)生淬滅；當(dāng)退火時，分子信標(biāo)探針解開環(huán)并與模板靶標(biāo)雜交，這樣熒光分子和淬滅基團(tuán)的物理距離就變大了，熒光淬滅的前提就打破了（圖5）。除了MGB探針，分子信標(biāo)探針也非常適合用于SNP檢測。▲ 圖5 分子信標(biāo)探針除了上述幾種類型的探針之外，還有嘗試將引物和探針功能相結(jié)合的技術(shù)，如Amplifluor、LUX等，在設(shè)計(jì)難度上有所提高，但使用時更簡便。各有其應(yīng)用的側(cè)重點(diǎn)和設(shè)計(jì)上的利弊，在此不多贅述。那么在熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，我們應(yīng)該如何進(jìn)行選擇呢？在這里，給大家總結(jié)了一些兩種方法的區(qū)別，供大家參考。表1 染料法和探針法的區(qū)別

2025-05-08 14:30:21熒光顯微鏡怎么調(diào)熒光: 熒光顯微鏡怎么調(diào)熒光：專業(yè)指南熒光顯微鏡作為現(xiàn)代生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究和材料科學(xué)中不可或缺的工具，廣泛應(yīng)用于觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)、分子定位以及各類熒光標(biāo)記物的追蹤。如何調(diào)節(jié)熒光顯微鏡中的熒光信號，以獲得清晰且高對比度的圖像，常常是初學(xué)者和有經(jīng)驗(yàn)的使用者都會遇到的挑戰(zhàn)。本文將詳細(xì)介紹熒光顯微鏡的熒光調(diào)節(jié)方法，包括如何選擇合適的濾光片、設(shè)置激發(fā)光源、優(yōu)化熒光強(qiáng)度等方面，幫助用戶提升實(shí)驗(yàn)效果和圖像質(zhì)量。熒光顯微鏡的基本構(gòu)成在調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的熒光效果之前，了解其基本構(gòu)成至關(guān)重要。熒光顯微鏡主要由光源、濾光片系統(tǒng)、樣品載物臺、反射鏡和相機(jī)等部分組成。光源提供激發(fā)光，而濾光片系統(tǒng)則用來過濾特定波長的光線，使得激發(fā)光照射到樣品上，進(jìn)而激發(fā)樣品發(fā)出熒光。為了優(yōu)化熒光圖像的質(zhì)量，正確調(diào)節(jié)每一個組成部分都是必要的。選擇合適的激發(fā)光源激發(fā)光源是熒光顯微鏡的核心之一，合適的激發(fā)波長能夠大化樣品的熒光信號。常見的激發(fā)光源包括氙燈、汞燈和LED燈等。選擇激發(fā)源時，首先要根據(jù)熒光染料的激發(fā)波長范圍來選定。不同的熒光染料對不同波長的激發(fā)光有佳響應(yīng)，因此確保激發(fā)源的波長與樣品的激發(fā)要求相匹配，是調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的步。設(shè)置合適的濾光片系統(tǒng) 濾光片系統(tǒng)在熒光顯微鏡中起著至關(guān)重要的作用。濾光片通常分為激發(fā)濾光片、放射濾光片和透射濾光片，分別用于選擇性地控制激發(fā)光的通過、分離樣品發(fā)出的熒光以及去除雜散光。在選擇濾光片時，應(yīng)根據(jù)染料的吸收和發(fā)射波長來確定合適的激發(fā)和發(fā)射濾光片。例如，對于綠色熒光蛋白(GFP)，選擇與其激發(fā)波長(488 nm)和發(fā)射波長(510 nm)相匹配的濾光片是十分必要的。優(yōu)化熒光強(qiáng)度在調(diào)整熒光顯微鏡時，熒光強(qiáng)度是影響圖像質(zhì)量的另一個關(guān)鍵因素。過低的熒光強(qiáng)度會導(dǎo)致圖像對比度不清晰，而過高的強(qiáng)度則可能導(dǎo)致信號飽和。通過調(diào)整激發(fā)光源的強(qiáng)度、曝光時間以及光學(xué)增益，可以獲得合適的熒光強(qiáng)度。樣品的濃度、染料的質(zhì)量以及熒光標(biāo)記物的穩(wěn)定性也會對熒光強(qiáng)度產(chǎn)生影響，因此在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)時刻注意這些變量。調(diào)整焦距和圖像對比度調(diào)整焦距是確保熒光圖像清晰的必要步驟。使用熒光顯微鏡時，焦距的精確調(diào)整能幫助獲得清晰的圖像。適當(dāng)?shù)膱D像對比度調(diào)整有助于突出熒光信號，減少背景噪音。通過微調(diào)曝光時間和亮度，也可以增強(qiáng)對比度，使得樣品的熒光信號更加鮮明。總結(jié) 調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的熒光效果是一個精細(xì)且復(fù)雜的過程，涉及到多個因素的協(xié)調(diào)。選擇合適的激發(fā)光源、濾光片系統(tǒng)的優(yōu)化、熒光強(qiáng)度的調(diào)整以及圖像的焦距與對比度設(shè)置，都是確保高質(zhì)量熒光圖像的重要步驟。通過深入理解并熟練掌握這些調(diào)節(jié)技巧，可以顯著提升實(shí)驗(yàn)的效果和圖像的清晰度。希望本文能為使用熒光顯微鏡的科研人員提供有價值的指導(dǎo)，幫助大家在熒光成像中獲得佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2023-05-08 19:13:14明美LED熒光光源助力顯微鏡熒光升級: 明美LED熒光光源助力顯微鏡熒光升級熒光顯微鏡具有特異性強(qiáng)、檢出率高等優(yōu)勢，因此在各種科研和醫(yī)學(xué)檢查應(yīng)用中使用廣泛，傳統(tǒng)熒光顯微鏡因?yàn)楣療艄庠聪拗疲斜容^多使用難點(diǎn)，明美針對這些問題，投入大量人力和資金，研發(fā)出了一系列LED熒光光源，助力顯微鏡熒光升級和傳統(tǒng)熒光顯微鏡升級LED熒光顯微鏡，取得市場廣泛認(rèn)可。熒光顯微鏡的常用光源通常都是白光光源，而熒光光源有高壓汞燈，氙燈，金屬鹵素?zé)艉蚅ED白光光源以及LED單波長光源，光源間各有優(yōu)劣勢，近期，北京用戶需要替換汞燈光源，因?yàn)楣療魤勖蹋桀A(yù)熱，操作繁瑣，明美北京區(qū)域工程師提供了四通道的LED熒光光源MG-120，壽命長，即開即關(guān)，操作簡單，解決的老師的使用煩惱熒光光源MG-120采用四通道獨(dú)立控制，可選BGUR等不同通道配置，壽命長，衰減慢，通常不需要更換燈泡及校準(zhǔn)，可以即開即用；控制方便，外部配備有控制器，能進(jìn)行特定波長開關(guān)和亮度記憶，減少熒光串色及熒光淬滅。此次，用戶是搭配奧林巴斯倒置顯微鏡IX73，該熒光光源已做測試，可適配各熒光顯微鏡如果您對熒光光源感興趣或存在疑問，歡迎與我們聯(lián)系，我們將竭誠為您服務(wù)！來源：https://www.mshot.com/article/1738.html

2023-06-12 14:09:33熒光生物顯微鏡應(yīng)用于CTC檢測: 級熒光生物顯微鏡MF43-M應(yīng)用于CTC檢測CTC檢測不僅特異性強(qiáng)、靈敏度高，能更早預(yù)知判斷，還能重復(fù)取樣，快速便捷，隨時監(jiān)測，在臨床診斷應(yīng)用廣泛。近期，明美湖南區(qū)域安裝科研級熒光生物顯微鏡MF43-M，以用于CTC檢測及FISH檢測，整體效果獲得用戶認(rèn)可。CTC檢測作為一種新型的非侵入性診斷手段，在一定程度上彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法的不足，有 “液體活檢”之稱，好的方法當(dāng)然少不了好的工具，明美科研級熒光生物顯微鏡MF43-M配備6孔落射熒光模塊和超長壽命LED熒光光源，可擴(kuò)展升級實(shí)現(xiàn)各種觀察方式，如明場、暗場、熒光等，高數(shù)值孔徑半復(fù)消色差物鏡成像清晰，尤其適合CTC檢測等應(yīng)用。科研級熒光生物顯微鏡MF43-M已取得醫(yī)療器械注冊證，嚴(yán)格的質(zhì)量把關(guān)及符合人體工程學(xué)的配件能幫您克服長期使用姿勢不舒服而導(dǎo)致肌肉勞損。可配套同樣擁有注冊資質(zhì)的熒光原位雜交MFISH軟件，實(shí)現(xiàn)高質(zhì)量的FISH成像。您若對熒光生物顯微鏡感興趣或存在疑問，歡迎與我們聯(lián)系，我們將竭誠為您服務(wù)！免責(zé)聲明本站無法鑒別所上傳圖片、字體或文字內(nèi)容的版權(quán)，如無意中侵犯了哪個權(quán)利人的知識產(chǎn)權(quán)，請來信或來電告之，本站將立即予以刪除，謝謝。來源：https://www.mshot.com/article/1761.html

2023-05-26 10:20:02FluorCam-Pro植物多光譜熒光成像系統(tǒng): FluorCam-Pro植物多光譜熒光成像系統(tǒng)是FluorCam葉綠素?zé)晒獬上窦夹g(shù)的最新高級擴(kuò)展產(chǎn)品。此系統(tǒng)既可用于PAM脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒鈩討B(tài)成像分析，又可用于UV紫外光對植物葉片激發(fā)產(chǎn)生的多光譜熒光成像測量分析，還可選配濾波器組對GFP、RFP、YFP、SYBR Green等熒光蛋白和熒光染料進(jìn)行穩(wěn)態(tài)熒光成像測量。測量對象包括葉片、果實(shí)、花朵、整株擬南芥或其他小型植株、苔蘚、微藻、大型藻類乃至特定的動物樣品。應(yīng)用領(lǐng)域：植物光合生理生態(tài)植物逆境脅迫生理與易感性植物初級代謝與次級代謝植物表型組學(xué)成像分析（Phenotyping）作物遺傳育種與抗性篩選種子萌發(fā)與活力監(jiān)測轉(zhuǎn)基因植株篩選功能特點(diǎn)：多激發(fā)光-多光譜熒光成像技術(shù)：通過兩種以上不同波長的光源激發(fā)植物樣品中不同的發(fā)色團(tuán)發(fā)出熒光并進(jìn)行成像檢測，即為多激發(fā)光多光譜熒光成像技術(shù)。植物的多光譜熒光主要包括葉綠素?zé)晒狻V紫外光激發(fā)多光譜熒光和熒光蛋白熒光FluorCam-Pro無需更換任何配件即可同步實(shí)現(xiàn)多激發(fā)光-多光譜熒光成像功能：PAM脈沖調(diào)制式葉綠素?zé)晒獬上褡贤饧ぐl(fā)F440、F520、F690、F740多光譜熒光成像GFP、RFP、YFP等常用熒光蛋白成像可根據(jù)用戶需要定制熒光蛋白或熒光染料成像，如BFP、CFP、SYBR Green、DAPI等可對黃酮、花青素含量進(jìn)行定量測量可進(jìn)行自動重復(fù)成像測量和無人值守監(jiān)測，可設(shè)置實(shí)驗(yàn)程序（Protocols）自動循環(huán)成像測量，成像測量數(shù)據(jù)自動按時間日期存入計(jì)算機(jī)（帶時間戳）測量樣品為各種活體植物樣品，包括葉片、花卉、果實(shí)、整株擬南芥或其他小型植物、微藻（包括液滴、多孔板、固體培養(yǎng)基）及大型藻類等技術(shù)指標(biāo)：一體式設(shè)計(jì)，自帶暗適應(yīng)箱體最佳成像面積：20×20cm測量參數(shù)：Fo, Fo’, Fs, Fm, Fm’, Fp, FtDn, FtLn, Fv, Fv'/ Fm', Fv/ Fm ,Fv',Ft,ΦPSII, NPQ_Dn, NPQ_Ln, Qp_Dn, Qp_Ln, qN, qL, QY, QY_Ln, Rfd, ETR等50多個葉綠素?zé)晒鈪?shù)；紫外激發(fā)多光譜熒光成像參數(shù)：F440、F520、F690、F740；熒光蛋白熒光強(qiáng)度參數(shù)Ft；每項(xiàng)參數(shù)均可顯示對應(yīng)二維熒光彩色圖像。并可測量計(jì)算黃酮醇指數(shù)Flavonol Index,、花青素指數(shù)Anthocyanin Index。具備完備的自動測量程序（protocol），可自由對自動測量程序進(jìn)行編輯1)Fv/Fm：測量參數(shù)包括Fo，F(xiàn)m，F(xiàn)v，QY等葉綠素?zé)晒鈪?shù)2)Kautsky誘導(dǎo)效應(yīng)：Fo，F(xiàn)p，F(xiàn)v，F(xiàn)t_Lss，QY，Rfd等葉綠素?zé)晒鈪?shù)3)Quenching熒光淬滅分析：Fo，F(xiàn)m，F(xiàn)p，F(xiàn)s，F(xiàn)v，QY，ΦII，NPQ，Qp，Rfd，qL等50多個葉綠素?zé)晒鈪?shù)4)Light Curve光響應(yīng)曲線：不同光強(qiáng)梯度條件下Fo，F(xiàn)m，QY，QY_Ln，ETR等葉綠素?zé)晒鈪?shù)5)MultiColor紫外激發(fā)多光譜熒光成像（選配）6)FPs熒光蛋白成像：GFP、YFP、RFP、BFP等（選配）熒光激發(fā)光源組：全LED光源，包括620nm紅光、5700K冷白光、735nm遠(yuǎn)紅光、365nm紫外光，445nm品藍(lán)光，470nm藍(lán)光，505nm青光，530nm綠光，590nm琥珀色光等高分辨率CCD相機(jī)1)圖像分辨率：1360×1024像素2)時間分辨率：在最高圖像分辨率下可達(dá)每秒20幀具備7位濾波輪，標(biāo)配葉綠素?zé)晒鉃V波器，根據(jù)用戶需要可定制紫外激發(fā)多光譜熒光和GFP、RFP、YFP、BFP等熒光蛋白專用濾波器FluorCam葉綠素?zé)晒獬上穹治鲕浖δ埽壕週ive（實(shí)況測試）、Protocols（實(shí)驗(yàn)程序選擇定制）、Pre–processing（成像預(yù)處理）、Result（成像分析結(jié)果）等功能菜單自動測量分析功能：可設(shè)置一個實(shí)驗(yàn)程序（Protocol）自動無人值守循環(huán)成像測量，重復(fù)次數(shù)及間隔時間客戶自定義，成像測量數(shù)據(jù)自動按時間日期存入計(jì)算機(jī)（帶時間戳）成像預(yù)處理：程序軟件可自動識別多個植物樣品或多個區(qū)域，也可手動選擇區(qū)域（Region of interest，ROI）。手動選區(qū)的形狀可以是方形、圓形、任意多邊形或扇形。軟件可自動測量分析每個樣品和選定區(qū)域的熒光動力學(xué)曲線及相應(yīng)參數(shù)，樣品或區(qū)域數(shù)量不受限制（>1000）輸出結(jié)果：高時間解析度熒光動態(tài)圖、熒光動態(tài)變化視頻、熒光參數(shù)Excel文件、直方圖、不同參數(shù)成像圖、不同ROI的熒光參數(shù)列表等應(yīng)用案例：1.抗病毒基因研究：葉綠素?zé)晒獬上衽cGFP成像聯(lián)合分析法國國家農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院一直致力于馬鈴薯y病毒組的抗病基因研究，通過不同基因編輯處理方法，驗(yàn)證抗病毒分子機(jī)制。相關(guān)研究中，研究人員利用FluorCam多光譜熒光成像系統(tǒng)的GFP熒光蛋白成像功能，定量分析感染面積與病毒積累量，從而直觀地反映了不同基因功能對擬南芥病毒抗性的影響。同時，葉綠素?zé)晒獬上駝t反映病毒對光合系統(tǒng)的損傷，同步提供植物的光合表型信息。參考文獻(xiàn)：Zafirov D, et al. 2021. When a knockout is an Achilles' heel: Resistance to one potyvirus species triggers hypersusceptibility to another one in Arabidopsis thaliana. Mol Plant Pathol. 22: 334–347Bastet A, et al. 2019. Mimicking natural polymorphism in eIF4E by CRISPR‐Cas9 base editing is associated with resistance to potyviruses. Plant Biotechnology Journal 17: 1736–1750Bastet A, et al. 2018. Trans-species synthetic gene design allows resistance pyramiding and broad-spectrum engineering of virus resistance in plants. Plant Biotechnology Journal: 1–132.不同顏色凌霄葉片的葉綠素?zé)晒馀c紫外激發(fā)多光譜熒光成像分析（易科泰EcoTech?實(shí)驗(yàn)室）產(chǎn)地：歐洲