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2025-01-10 10:52:26電化學(xué)原位紅外光譜儀: 電化學(xué)原位紅外光譜儀是一種集電化學(xué)與紅外光譜技術(shù)于一體的高精度分析儀器。它能夠在電化學(xué)反應(yīng)過程中，實(shí)時(shí)原位檢測反應(yīng)界面上物種的紅外光譜，從而揭示電化學(xué)反應(yīng)的機(jī)理和動(dòng)力學(xué)過程。該儀器具有高靈敏度、高分辨率、實(shí)時(shí)監(jiān)測等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于材料科學(xué)、能源研究、電化學(xué)催化等領(lǐng)域。通過電化學(xué)原位紅外光譜儀，研究人員可以深入了解電化學(xué)反應(yīng)的本質(zhì)，為新能源開發(fā)、材料設(shè)計(jì)等提供重要依據(jù)。

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電化學(xué)原位紅外光譜儀問答

2025-04-15 16:00:17紅外光譜儀注意事項(xiàng)有哪些？: 紅外光譜儀作為一種重要的分析工具，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、材料、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。其通過測量樣品對(duì)紅外光的吸收情況，能夠獲得分子結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分等信息。為了確保紅外光譜儀的測試結(jié)果準(zhǔn)確性和儀器的長期穩(wěn)定運(yùn)行，使用時(shí)需要特別注意一些事項(xiàng)。本文將詳細(xì)探討紅外光譜儀使用過程中常見的注意事項(xiàng)，幫助用戶更好地進(jìn)行操作和維護(hù)。紅外光譜儀的校準(zhǔn)非常關(guān)鍵。在進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)前，確保儀器已通過適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)。儀器的校準(zhǔn)不僅可以保證測量數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，還能避免因設(shè)備偏差而導(dǎo)致的誤差。在校準(zhǔn)過程中，需要選擇適合實(shí)驗(yàn)需求的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，嚴(yán)格遵循廠商提供的操作手冊(cè)進(jìn)行操作，避免人為因素引入的不確定性。樣品的處理和準(zhǔn)備也是影響測試結(jié)果的重要因素。紅外光譜儀通常要求樣品具有良好的均勻性和適當(dāng)?shù)暮穸取?duì)于液體樣品，可以使用特定的液體池，避免氣泡和雜質(zhì)的干擾；固體樣品則需要均勻研磨或切割，確保樣品表面光滑，以減少光譜信號(hào)的畸變。樣品的純度也對(duì)測試結(jié)果產(chǎn)生直接影響，因此，在使用前，好對(duì)樣品進(jìn)行必要的預(yù)處理，去除其中的雜質(zhì)。除了樣品本身，環(huán)境因素對(duì)紅外光譜儀的測試結(jié)果也具有不容忽視的影響。紅外光譜儀的精度很大程度上依賴于測試環(huán)境的溫濕度條件。過高或過低的溫度、濕度變化過大的環(huán)境都會(huì)影響儀器的性能，甚至可能導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。因此，在進(jìn)行測量時(shí)，應(yīng)將儀器放置在溫濕度控制較為穩(wěn)定的環(huán)境中，以確保儀器能夠正常工作。在操作過程中，使用者還需注意紅外光譜儀的定期維護(hù)與清潔。儀器的光學(xué)部件，如透鏡和反射鏡，容易受到灰塵和污染物的影響，這會(huì)導(dǎo)致光學(xué)性能下降，影響測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，定期清潔光學(xué)元件，特別是鏡頭和光源區(qū)域，是保持儀器高效運(yùn)行的基本保障。也需要定期檢查儀器的光源和探測器，確保它們的穩(wěn)定性和靈敏度。為了延長紅外光譜儀的使用壽命，避免頻繁發(fā)生故障，操作人員應(yīng)嚴(yán)格遵循廠商的操作規(guī)范。對(duì)于不同型號(hào)的儀器，使用手冊(cè)中往往會(huì)提供專門的維護(hù)指南，用戶應(yīng)根據(jù)儀器的具體要求進(jìn)行保養(yǎng)。定期的檢查和專業(yè)的維修保養(yǎng)是防止設(shè)備故障和延長其使用周期的重要手段。紅外光譜儀的應(yīng)用也需要操作人員具備一定的專業(yè)知識(shí)。正確理解和分析紅外光譜圖是至關(guān)重要的，特別是在復(fù)雜樣品分析時(shí)，用戶需要具備較強(qiáng)的化學(xué)分析能力和數(shù)據(jù)解析能力。否則，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論，從而影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)或應(yīng)用。紅外光譜儀作為精密的實(shí)驗(yàn)工具，使用時(shí)需要細(xì)致關(guān)注多個(gè)方面，從校準(zhǔn)、樣品處理、環(huán)境控制到定期維護(hù)等，均是確保測量準(zhǔn)確性和儀器性能的重要因素。專業(yè)的操作與細(xì)心的保養(yǎng)能大程度地發(fā)揮其優(yōu)勢，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。

2025-04-15 16:00:17傅立葉紅外光譜儀步驟哪些必不可少？: 傅立葉紅外光譜儀步驟傅立葉紅外光譜儀（FTIR）作為現(xiàn)代分析化學(xué)中常見且重要的儀器之一，廣泛應(yīng)用于材料分析、化學(xué)成分鑒定以及污染監(jiān)測等領(lǐng)域。通過對(duì)紅外光譜的解析，F(xiàn)TIR能夠準(zhǔn)確地揭示樣品的分子結(jié)構(gòu)和功能基團(tuán)。本文將詳細(xì)介紹傅立葉紅外光譜儀的操作步驟，從樣品準(zhǔn)備到數(shù)據(jù)分析的整個(gè)過程，幫助用戶更好地理解和掌握該技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用。樣品準(zhǔn)備與處理傅立葉紅外光譜儀的使用首先要求樣品的充分準(zhǔn)備。根據(jù)樣品的物理狀態(tài)（固態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)），處理方法有所不同。在處理固態(tài)樣品時(shí)，通常需要將其磨成細(xì)粉，混合少量的KBr（氯化鉀）粉末，并通過壓片法制備成薄片，保證其透光性。液體樣品則可以直接滴加到紅外窗片上，或通過配制成薄膜來進(jìn)行測試。氣體樣品一般通過氣體池進(jìn)行分析，確保測試氣體的流動(dòng)性和均勻性。在進(jìn)行樣品準(zhǔn)備時(shí)，操作人員需要特別注意避免樣品的污染或揮發(fā)。因?yàn)檫@些因素會(huì)直接影響的光譜結(jié)果，導(dǎo)致誤差。因此，樣品準(zhǔn)備過程中應(yīng)確保清潔操作，并使用高質(zhì)量的化學(xué)試劑。設(shè)備設(shè)置與校準(zhǔn) 傅立葉紅外光譜儀的操作需要先進(jìn)行必要的設(shè)備設(shè)置與校準(zhǔn)。打開儀器并進(jìn)行自檢，確保所有硬件運(yùn)行正常。接著，根據(jù)不同的樣品類型，選擇適當(dāng)?shù)墓庾V范圍和掃描模式。FTIR通常工作在4000 cm-1至400 cm-1的紅外區(qū)域，用戶應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)置合適的掃描次數(shù)和分辨率。在進(jìn)行數(shù)據(jù)采集之前，校準(zhǔn)是確保實(shí)驗(yàn)精度的重要步驟。常見的校準(zhǔn)方法包括使用標(biāo)準(zhǔn)的波長校準(zhǔn)片，或進(jìn)行背景掃描。背景掃描是指在沒有樣品的情況下，對(duì)環(huán)境進(jìn)行一次測量，獲得背景光譜。這樣，后續(xù)樣品測試時(shí)能夠扣除環(huán)境的影響，提高測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。數(shù)據(jù)采集與分析當(dāng)樣品準(zhǔn)備完畢，儀器設(shè)置完成后，開始進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。傅立葉紅外光譜儀通過紅外光源照射樣品，樣品對(duì)不同波長的紅外光具有不同的吸收特性，得到樣品的吸收光譜。在測試過程中，儀器會(huì)將光譜信息通過傅立葉變換算法轉(zhuǎn)化為可供分析的數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)采集完畢后，用戶需要對(duì)光譜圖進(jìn)行詳細(xì)的分析。檢查光譜的主要吸收峰，這些峰值對(duì)應(yīng)的是樣品分子中的特定化學(xué)鍵。通過與已知的標(biāo)準(zhǔn)譜庫進(jìn)行比對(duì)，分析樣品的成分和結(jié)構(gòu)。不同化學(xué)基團(tuán)會(huì)在紅外光譜上產(chǎn)生特定的吸收峰，例如，C=O、N-H、C-H等基團(tuán)的吸收特征非常明顯，能夠幫助用戶迅速定位到樣品的分子結(jié)構(gòu)。結(jié)果驗(yàn)證與報(bào)告為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，用戶需對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證?？梢酝ㄟ^對(duì)比不同批次樣品的光譜結(jié)果，或者使用其他分析方法（如GC-MS、NMR）進(jìn)行輔助驗(yàn)證。如果光譜數(shù)據(jù)與已知標(biāo)準(zhǔn)相符，則可以確認(rèn)樣品的成分與結(jié)構(gòu)。在完成數(shù)據(jù)分析后，生成的報(bào)告需詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)條件、樣品信息、光譜圖及分析結(jié)論。報(bào)告的準(zhǔn)確性對(duì)于后續(xù)的科研工作或質(zhì)量控制至關(guān)重要。總結(jié) 傅立葉紅外光譜儀作為一種強(qiáng)大的分析工具，其操作過程雖有一定復(fù)雜性，但通過合理的樣品準(zhǔn)備、設(shè)備設(shè)置、數(shù)據(jù)采集與分析，可以得到高精度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。精確的操作步驟和科學(xué)的分析方法是確保結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。通過對(duì)傅立葉紅外光譜技術(shù)的掌握，不僅能夠提高實(shí)驗(yàn)效率，更能為材料分析和化學(xué)研究提供有力的支持。

2025-04-21 12:45:20在線電化學(xué)質(zhì)譜儀操作過程有哪些？: 在線電化學(xué)質(zhì)譜儀操作過程在線電化學(xué)質(zhì)譜儀作為一種高效、的分析工具，廣泛應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測、化學(xué)分析及生命科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。其通過電化學(xué)反應(yīng)與質(zhì)譜分析的結(jié)合，能夠?qū)崟r(shí)檢測復(fù)雜樣品中的微量成分，提供快速且的分析結(jié)果。本文章將詳細(xì)介紹在線電化學(xué)質(zhì)譜儀的操作過程，幫助科研人員和工程師更好地掌握其使用方法，提升實(shí)驗(yàn)效率和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。在線電化學(xué)質(zhì)譜儀的核心原理是將電化學(xué)分析與質(zhì)譜分析相結(jié)合。電化學(xué)部分通過施加電壓使目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生的電流信號(hào)與物質(zhì)濃度成正比。這一過程不僅能實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng)過程中的電流變化，還能準(zhǔn)確分析樣品中的成分。質(zhì)譜部分則負(fù)責(zé)對(duì)樣品中的離子進(jìn)行質(zhì)量分析，通過測量離子的質(zhì)量-電荷比（m/z）來鑒定樣品成分。因此，操作該儀器時(shí)需要準(zhǔn)確設(shè)置電化學(xué)反應(yīng)條件，并結(jié)合質(zhì)譜儀的設(shè)置，以確保獲得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 1. 準(zhǔn)備工作與儀器檢查操作在線電化學(xué)質(zhì)譜儀前，首先要進(jìn)行儀器的檢查與校準(zhǔn)。確保質(zhì)譜儀和電化學(xué)設(shè)備的電源和連接線完好無損。檢查電化學(xué)池的電極是否干凈，并確認(rèn)電極與溶液接觸良好。此時(shí)還應(yīng)對(duì)儀器的電子系統(tǒng)進(jìn)行初始化，確保系統(tǒng)能夠穩(wěn)定運(yùn)行。 2. 樣品制備與電化學(xué)反應(yīng) 樣品的準(zhǔn)備是操作過程中至關(guān)重要的一步。不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰煌臉悠诽幚矸绞?。一般而言，樣品需要溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，并根?jù)需要調(diào)整其濃度。在樣品制備過程中，要特別注意避免引入雜質(zhì)，這會(huì)干擾電化學(xué)反應(yīng)的準(zhǔn)確性。電化學(xué)反應(yīng)的過程中，需要根據(jù)具體分析目標(biāo)設(shè)定適當(dāng)?shù)碾妷汉碗娏鲄?shù)。在此過程中，電化學(xué)池中的電極會(huì)進(jìn)行氧化還原反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物的電流信號(hào)會(huì)被記錄并傳輸給質(zhì)譜儀。通常情況下，電化學(xué)反應(yīng)的電流與樣品濃度相關(guān)，通過調(diào)節(jié)電壓或電流可以優(yōu)化反應(yīng)的靈敏度。 3. 質(zhì)譜分析與數(shù)據(jù)處理一旦電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物生成，質(zhì)譜儀就開始工作，通過分析電化學(xué)反應(yīng)生成的離子，提供其質(zhì)量-電荷比（m/z）數(shù)據(jù)。操作人員需要根據(jù)質(zhì)譜圖譜分析離子峰，確定樣品中各個(gè)成分的濃度和結(jié)構(gòu)特征。此時(shí)，質(zhì)譜儀的設(shè)置包括掃描速度、質(zhì)量范圍、離子源溫度等，都需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。對(duì)于復(fù)雜樣品，數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性顯得尤為重要。質(zhì)譜數(shù)據(jù)通常需要經(jīng)過信號(hào)去噪、峰值識(shí)別、定量分析等多個(gè)步驟，才能獲得準(zhǔn)確的分析結(jié)果。 4. 后期分析與實(shí)驗(yàn)優(yōu)化在完成基本的實(shí)驗(yàn)分析后，操作人員需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)和評(píng)價(jià)。這一過程中，可以通過與已知標(biāo)準(zhǔn)樣品的對(duì)比，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。如果發(fā)現(xiàn)某些數(shù)據(jù)偏差較大，則需要回溯實(shí)驗(yàn)條件，檢查是否存在電化學(xué)或質(zhì)譜方面的操作失誤，或樣品準(zhǔn)備不當(dāng)?shù)那闆r。針對(duì)不同類型的分析需求，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)反饋對(duì)儀器設(shè)置進(jìn)行優(yōu)化。例如，調(diào)整電化學(xué)反應(yīng)的電壓，改變質(zhì)譜儀的掃描模式，或使用更高靈敏度的檢測方式，提升實(shí)驗(yàn)的檢測范圍和準(zhǔn)確度。結(jié)語在線電化學(xué)質(zhì)譜儀作為一種高度集成的分析工具，憑借其電化學(xué)與質(zhì)譜相結(jié)合的優(yōu)勢，已廣泛應(yīng)用于各類科研和工業(yè)領(lǐng)域。在實(shí)際操作過程中，精確的儀器調(diào)試、樣品處理與數(shù)據(jù)分析都是確保實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。通過不斷優(yōu)化操作過程，能夠大大提高實(shí)驗(yàn)效率，獲取更為的分析數(shù)據(jù)，助力科研工作的發(fā)展。

2024-11-20 16:17:53紅外光譜儀有哪些功能？如何做好清潔保養(yǎng)？: 紅外光譜儀如何清潔：保持儀器性能的關(guān)鍵紅外光譜儀作為一種精密的分析儀器，在化學(xué)、制藥、環(huán)境監(jiān)測等多個(gè)領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。由于其高度敏感的性質(zhì)，任何污漬、灰塵或其他污染物都可能影響其測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，定期且正確的清潔紅外光譜儀，不僅能延長儀器的使用壽命，還能確保測試數(shù)據(jù)的可靠性。本文將詳細(xì)介紹如何清潔紅外光譜儀，幫助用戶正確維護(hù)這一高精密儀器。一、清潔前的準(zhǔn)備工作在進(jìn)行任何清潔操作之前，首先要確保紅外光譜儀已完全關(guān)閉，并拔掉電源插頭。斷電不僅是為了安全，也能避免在清潔過程中不小心操作引發(fā)儀器損壞。隨后，準(zhǔn)備一些必要的清潔工具，如超細(xì)纖維布、專用清潔液、氣吹器、鏡頭紙以及棉簽等。這些工具能夠有效地清除表面污漬和細(xì)小灰塵，同時(shí)不會(huì)對(duì)儀器造成損傷。二、清潔外部表面紅外光譜儀的外部表面通常會(huì)積累灰塵、指紋等污漬。為避免這些污染物影響儀器的外觀和操作，應(yīng)使用超細(xì)纖維布進(jìn)行擦拭。超細(xì)纖維布具有良好的吸附性能，可以輕松清除表面灰塵，且不容易刮傷儀器表面。如果污漬較為頑固，可以輕輕噴灑一些專業(yè)的清潔液，然后用布擦拭干凈。對(duì)于一些細(xì)小的縫隙和按鈕等難以觸及的部位，可以使用氣吹器清除灰塵。氣吹器的氣流能夠有效去除細(xì)小顆粒，避免用手觸碰而可能帶來的污染或刮傷。三、清潔光學(xué)部件紅外光譜儀的光學(xué)部件，如鏡頭、透鏡和光纖等，是影響測量結(jié)果精度的重要因素。因此，這些部件的清潔需要特別小心。通常，可以使用專用鏡頭紙和少量的清潔液，輕輕擦拭光學(xué)鏡頭。務(wù)必避免使用硬物或過于濕潤的布料，以免損壞光學(xué)表面。在清潔過程中，要注意操作的輕柔度，并避免過度摩擦。鏡頭上的指紋或污漬可以通過鏡頭紙輕松去除，但如有較頑固的污染物，可以借助棉簽沾少量清潔液進(jìn)行擦拭。四、清潔內(nèi)部部件紅外光譜儀的內(nèi)部部件，如光源、探測器和光學(xué)模塊，通常需要專業(yè)人員進(jìn)行清潔。如果需要自己進(jìn)行內(nèi)部清潔，應(yīng)非常小心?？梢允褂脷獯灯鬏p輕吹去內(nèi)部積塵，避免使用任何液體清潔劑，以免液體進(jìn)入儀器內(nèi)部造成損壞。如果發(fā)現(xiàn)有較大的污漬或污垢，建議尋求專業(yè)的維護(hù)服務(wù)，以確保不會(huì)影響儀器的性能。五、定期檢查與維護(hù)除了日常的清潔工作外，紅外光譜儀還需要定期進(jìn)行維護(hù)檢查。這包括校準(zhǔn)光譜儀、檢查光源的穩(wěn)定性和探測器的靈敏度等。定期的專業(yè)維護(hù)不僅能確保儀器的精度和穩(wěn)定性，還能幫助發(fā)現(xiàn)潛在的問題，防止出現(xiàn)故障。

2022-12-06 13:04:21探秘腫瘤微環(huán)境，原位“看透”細(xì)胞因子: 細(xì)胞因子是腫瘤微環(huán)境（Tumor Microenvironment,TME）中細(xì)胞通訊的關(guān)鍵介質(zhì)，在癌癥的發(fā)生、發(fā)展、治療和預(yù)后等多個(gè)方面發(fā)揮重要作用。在過去的 40 年中，細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體作為癌癥靶點(diǎn)或癌癥治療方法得到了廣泛的研究。目前公認(rèn)的臨床前治療策略為增強(qiáng)干擾素和白細(xì)胞介素（包括 IL-2 ，IL-7 ，IL-12 和 IL-15 ）的生長抑制和免疫刺激作用，或抑制細(xì)胞因子（如 TNF ，IL-1β 和 IL-6 ）的炎癥和促進(jìn)腫瘤的作用[1]。圖 1 . 細(xì)胞因子在腫瘤微環(huán)境中的作用特定細(xì)胞因子的表達(dá)也與腫瘤細(xì)胞的高存活率和高轉(zhuǎn)移性密切相關(guān)。其中促炎細(xì)胞因子 IL-6 和 IL-8 與多種癌癥相關(guān)，包括淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸直腸癌等 [2,3]。因此，分析細(xì)胞因子的表達(dá)是一種重要的診斷工具和預(yù)測癌癥預(yù)后的關(guān)鍵因素。非放射性的 RNA 原位雜交技術(shù)（ViewRNA ISH）是一種高靈敏度的檢測細(xì)胞因子表達(dá)的有效方法，并且可以對(duì) 1 至 4 個(gè) mRNA 目標(biāo)進(jìn)行多重分析。檢測原理如下圖所示：圖 2 . ViewRNA ISH 檢測原理安捷倫BioTek Cytation 5 多功能細(xì)胞成像微孔板檢測系統(tǒng)，可容納多達(dá)四個(gè)熒光通道同時(shí)成像，快速并出色地成多色熒光成像。儀器配備的高內(nèi)涵分析軟件可自動(dòng)計(jì)算細(xì)胞內(nèi) RNA 的表達(dá)水平。Cytation 5 活細(xì)胞成像工作站結(jié)合ViewRNA ISH，為細(xì)胞因子研究提供了一種高效率、高靈敏度和可重復(fù)的檢測方法。實(shí)驗(yàn)案例分享實(shí)驗(yàn)一．細(xì)胞因子mRNA的成像和分析為研究細(xì)胞因子mRNA 在不同營養(yǎng)條件下的表達(dá)情況，設(shè)置兩組對(duì)照實(shí)驗(yàn)。陽性對(duì)照細(xì)胞培養(yǎng)于完全培養(yǎng)基中，而陰性對(duì)照細(xì)胞經(jīng)過 18 小時(shí)的血清饑餓處理。隨后加入 ViewRNA 探針以標(biāo)記 IL-6 、IL-8 和 ACTB mRNA ，在Cytation 5 上分別使用 RFP 、GFP 、Cy5 和 DAPI 通道對(duì)探針進(jìn)行成像完成 ISH 細(xì)胞分析。圖像結(jié)果表明：細(xì)胞因子mRNA 的表達(dá)在營養(yǎng)匱乏的條件下會(huì)顯著降低。圖 3 . 陽性和陰性對(duì)照組成像。HCT116 放大 20 倍圖像作為（ A ）陽性對(duì)照和（ B ）陰性對(duì)照。MDA-MB-231 細(xì)胞放大 40 倍的圖像作為（ C ）陽性對(duì)照和（ D ）陰性對(duì)照。藍(lán)色：DAPI 染色的細(xì)胞核；綠色：標(biāo)記 IL-8 mRNA ；橙色：標(biāo)記 IL-6 mRNA ；紅色：標(biāo)記 ACTB mRNA 。接下來為了定量分析細(xì)胞因子表達(dá)，首先在 Cytation 5 的 DAPI 通道下進(jìn)行細(xì)胞核計(jì)數(shù)，以確定每孔的細(xì)胞數(shù)量（圖 4A ）。然后分別在GFP 、RFP 通道進(jìn)行細(xì)胞因子探針（ IL-6 或 IL-8 ）的熒光信號(hào)分析（圖 4B ）。通過細(xì)胞熒光信號(hào)的比率評(píng)估不同實(shí)驗(yàn)條件下的細(xì)胞因子表達(dá)（圖 5 ）。圖 4 . 每個(gè)細(xì)胞的熒光信號(hào)分析。( A ) 使用 Agilent-BioTek Gen5 軟件進(jìn)行細(xì)胞分析圈選出 DAPI 標(biāo)記的細(xì)胞核；( B ) 熒光標(biāo)記的 IL-8 信號(hào)的圖像分析。如圖 5 所示，使用 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 這一組合準(zhǔn)確的量化了細(xì)胞內(nèi) IL-6 和 IL-8 mRNA 的表達(dá)。圖 5 . MDA-MB-231 細(xì)胞中 IL-8 表達(dá)和 HCT116 細(xì)胞中 IL-6 表達(dá)，并以細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行校正。實(shí)驗(yàn)二．誘導(dǎo)細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá) 使用不同劑量的 IL-1β 刺激 DU145 細(xì)胞，以分析細(xì)胞因子的 mRNA 的表達(dá)（圖6）。圖 7 結(jié)果顯示：雖然 IL-6 和 IL-8 的 mRNA 表達(dá)增加，但 IL-8 的表達(dá)變化更為顯著，這與先前研究結(jié)果一致[4]。IL-1β 的最高劑量下，這兩種細(xì)胞因子的表達(dá)減少則是由于細(xì)胞毒性。這驗(yàn)證了該檢測方法的可行性與穩(wěn)定性。圖 6 . 不同濃度的 IL-1β 刺激下的 IL-6 、IL-8 和 ACTB 熒光 mRNA 探針信號(hào) ( A ) 0 ng/mL；( B ) 0.02 ng/mL ；0.128 ng/mL；( D ) 0.8 ng/mL。藍(lán)色：DAPI染色的細(xì)胞核；綠色：標(biāo)記的IL-8 mRNA；橙色：標(biāo)記的 IL-6 mRNA ；紅色：標(biāo)記的 ACTB mRNA 。圖 7 . 不同濃度的 IL-1β 刺激下 DU145 細(xì)胞中 IL-6 和 IL-8 mRNA 的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)三．抑制細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá) 研究表明絲裂原活化蛋白激酶（ MAPK ）可調(diào)節(jié) IL-8 ，并證明用 MAPK/ERK 抑制劑 U 0126 治療可減少 DU145 和 MDA-MB-231 細(xì)胞中的炎癥細(xì)胞因子[4,5]。為了確認(rèn)這一現(xiàn)象并驗(yàn)證 ViewRNA ISH 和 Cytation 5 這一組合的能力，將不同濃度的 U 0126 加入到每種細(xì)胞類型中孵育 30 分鐘。然后用 1 ng/mL 的 IL-1β 刺激 DU145 細(xì)胞達(dá) 3 小時(shí)，而 MDA-MB-231 細(xì)胞未被刺激。使用 GFP 和 RFP 通道進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和圖像分析以評(píng)估在 U 0126 治療后 IL-8 和 IL-6 細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá)。采集的圖像（圖 8 ）和計(jì)算的熒光信號(hào)強(qiáng)度（圖 9 ）證實(shí)了 U 0126 的抑制作用。此外，也驗(yàn)證了該方法的靈敏度，可以準(zhǔn)確識(shí)別給予抑制劑后 mRNA 的表達(dá)變化。圖 8. U 0126 抑制 IL-8 mRNA 的表達(dá)。圖像顯示了在不同濃度的 U 0126 處理后 ( A-E ) MDA-MB-231 細(xì)胞內(nèi) IL-6 、IL-8 和 ACTB 熒光 mRNA 探針信號(hào)；( F-J ) 為 DU145 細(xì)胞。藍(lán)色：DAPI 染色的細(xì)胞核；綠色：標(biāo)記的 IL-8 mRNA ；橙色：標(biāo)記的 IL-6 mRNA ；紅色：標(biāo)記的 ACTB mRNA 。圖 9 . U 0126 治療后 IL-8 和 IL-6 mRNA 在 MDA-MB-231 和 DU 145 細(xì)胞中的表達(dá)結(jié) 語ThermoFisher 的 ViewRNA ISH 細(xì)胞分析試劑盒和探針提供一種靈敏的方法來檢測 mRNA 表達(dá)。該方法在安捷倫BioTek Cytation 5 細(xì)胞成像系統(tǒng)的加持下得以更更快地采集多熒光通道的圖像，并更精準(zhǔn)的計(jì)算出每一個(gè)細(xì)胞的熒光信號(hào)強(qiáng)度。這種檢測、成像和分析的完美結(jié)合提供了一種靈敏、靈活和高通量的方法用以檢測細(xì)胞因子 mRNA 的表達(dá)。參考文獻(xiàn)：[1] Propper DJ, Balkwill FR. Harnessing cytokines and chemokines for cancer therapy. Nat Rev Clin Oncol. 2022 Apr;19(4):237-253.[2] Kampan NC, Xiang SD, McNally OM, Stephens AN, Quinn MA, Plebanski M. Immunotherapeutic Interleukin-6 or Interleukin-6 Receptor Blockade in Cancer: Challenges and Opportunities. Curr Med Chem. 2018;25(36):4785-4806.[3] Vecchi L, Mota STS, Zóia MAP, Martins IC, de Souza JB, Santos TG, Beserra AO, de Andrade VP, Goulart LR, Araújo TG. Interleukin-6 Signaling in Triple Negative Breast Cancer Cells Elicits the Annexin A1/Formyl Peptide Receptor 1 Axis and Affects the Tumor Microenvironment. Cells. 2022 May 20;11(10):1705.[4] Kooijman R, Himpe E, Potikanond S, Coppens A. Regulation of interleukin-8 expression in human prostate cancer cells by insulin-like growth factor-I and inflammatory cytokines. Growth Horm IGF Res. 2007 Oct;17(5):383-91.[5] Chelouche-Lev D, Miller CP, Tellez C, Ruiz M, Bar-Eli M, Price JE. Different signalling pathways regulate VEGF and IL-8 expression in breast cancer: implications for therapy. Eur J Cancer. 2004 Nov;40(16):2509-18.