一、豬流行性腹瀉病毒抗體檢測試劑盒

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Epidemic Diarrhea Virus (ELISA)

二、包裝規格  96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

三、預期用途  豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病，以嘔吐、腹瀉和食欲下降為基本特征，各種年齡的豬均易感。

本試劑盒用于檢測豬血清、血漿中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV-Ab），可用于豬流行性腹瀉病毒疫苗免疫效果評價。

四、試劑盒原理

豬流行性腹瀉病毒抗體檢測試劑盒系由預包被豬流行性腹瀉病毒（PEDV）重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬流行性腹瀉病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有豬流行性腹瀉病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬流行性腹瀉病毒抗體。

五、試劑盒組成

酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值。

【參考值】實驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應≤0.3，陽性對照的平均OD值即ODPC應≥0.6。

【檢驗結果的解釋】

1.樣品的OD值即ODS；

2.閾值計算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；

SP值≥0.2，結果判定為陽性；SP值＜0.2，結果判定為陰性。

3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。