深圳艾瑞斯生產的氧氟沙星ELISA檢測試劑盒原理及用途

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測蜂蜜、動物組織（雞肉、豬肉、魚、蝦）、牛奶、奶粉和雞蛋等樣本中的氧氟沙星藥物（ofloxacin，OFX），試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的氧氟沙星藥物和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗氧氟沙星藥物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含氧氟沙星藥物含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中氧氟沙星藥物的殘留量。

氧氟沙星ELISA檢測試劑盒技術指標

2.1 試劑盒靈敏度：1.5ppb(ng/ml)

2.2 反應模式：25℃，45min～15min

2.3 檢測下限：

組織（雞肉、豬肉、魚、蝦） ………2ppb

蜂蜜 ……………………………………2ppb

牛奶 ……………………………………20ppb

奶粉 ……………………………………50ppb

雞蛋 ……………………………………30ppb

尿液 ……………………………………5ppb

血清 ……………………………………30ppb

2.4 交叉反應率：

氧氟沙星…………………………………100%

2.5 樣本回收率：

組織、蜂蜜、牛奶、奶粉、雞蛋、血清……85%±15%

3 試劑盒組成

酶標板……………………………96孔

標準液：各1ml

0ppb、1.5ppb、3ppb、6ppb、12ppb、24ppb

酶標記物（紅蓋）……………………5.5ml

抗體工作液（藍蓋）…………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

5×復溶液（黃蓋） …………………50ml

說明書…………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個

酶聯免疫試驗步驟

將所需試劑從4℃冷藏環境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1 編    號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

2 加樣反應：加標準品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應45分鐘。

3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，甩去孔內液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

4 顯    色：每孔加入底物液A 50μl，再加底物液B 50μl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍色過淺，可適當延長反應時間）。

5 終    止：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，終止反應。

6 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應在終止反應后10分鐘內完成。

注意事項

1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

2 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3 混合要均勻，洗板要徹底，在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性。

4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。

7 反應終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。